Основы гистологической техники. Лекция 4.

Темы:
1. Достоинства и недостатки вибротомии
2. Устройство вибратома
3. Подготовка препарата для вибротомии
4. Основные ошибки при вибротомировании

Дополнительно:

[АлексейЛк-шй]

на 26.25 указан параметр амплитуды лезвия - имеется ввиду расстояние при смещение лезвия относительно центральной оси (не путать с частотой вибрации), вероятно этот параметр не особенно на что то влияет, на некоторых моделях стоит заданная амплитуда в 0.5мм и они режут как ни в чем не бывало даже эмбриональный мышиный мозг. При увеличении амплитуды кстати резко возрастает вибрация всей системы, так что на крайних верхних значениях смысла менять амплитуду скорее всего нет.

[АлексейЛк-шй]

на 16.45 сказано про деформацию лезвия и его перекос, что приводит к ухудшению качества среза. Такой эффект никогда не наблюдался у меня при использовании обычных промышленных трапецеидальных лезвий, которые отлично режут срезы толщиной от 100мкм, при этом обладают такой жесткостью что перекосы внутри лезвия в общем то исключены. Весьма рекомендую их опробовать.

[АлексейЛк-шй]

на 21.45 указано про использование агарозы - она достаточно дорогая (даже самая простая), вместо агарозы отлично подходит обычный агар-агар из любого магазина, из него делается 5% раствор. Пузырьки в 5% агар-агаре при застывании (сначала они всегда есть) кстати особо не наблюдаются (видимо схлопываются в итоге), по крайней мере не помню у себя таких проблем.

[АлексейЛк-шй]

на 6.45 указаны недостатки вибрационного слайсера, тут можно прокомментировать некоторые ньюансы
1) резка отдельными срезами не является недостатком, так как позволяет оператору в любой момент остановить процедуру резки в случае выявления каких либо неполадок. По времени резка отдельными срезами так же укладывается в разумные сроки, образец мозга взрослой мыши можно полностью прорезать на срезы 150мкм за 2 часа, это не очень долго
2) блок ограничен размерами ~ 30x40мм для большинства моделей, и 70х40мм для моделей Leica VT1000 и 70х70мм для DSK3000
3) минимальная толщина среза для нервной ткани идет от 80-100мкм, ниже я не получал ни разу (Thermo HM650V и Campden Instruments HA752), и срезы 100-150 мкм оптимальны для флуоресцентной микроскопии, не только для конфокальной
6) срезы монтруются кисточкой на стекло, не нужно какое то специальное покрытие на них, я бы не сказал что это сложно монтировать. На стекло уходит обычно 2-4 минуты.
7) работа с любым микротомом требует длительного времени обучения
8) заметные параллельные полосы остаются если расшатан вибрационный механизм лезвия, само лезвие не зафиксировано до конца или если столик с образцом зафиксирован не плотно. Если система отрегулирована и все плотно зафиксировано, полос быть не должно, точнее они почти не заметны.

[АлексейЛк-шй]

31.44 - глицерин 80% очень уж жидкий, для долговременных препаратов лучше использовать раствор Mowiol-4.88, в сети есть протоколы его приготовления.